ADC靶点蛋白供应商怎么选？关注SPR亲和力表征等关键质量指标

在ADC研发中，重组靶点蛋白主要用于抗体筛选、结合活性评价等，其纯度、聚集状态以及构象完整性会影响实验数据的可靠性。

SPR等无标记实时分析技术可获得ka、kd和KD等动力学参数，其结果受到蛋白状态、固定方式和表面密度等因素影响。因此，选择具有明确构建信息、良好均一性和经过结合活性验证的靶点蛋白，有助于提高候选抗体或者ADC分子评价结果的可重复性和可解释性。义翘神州的ADC靶点蛋白覆盖140多个热门ADC药物靶点，结合活性经ELISA、SPR、BLI等多平台及抗体药验证，并具有高批间一致性。

ADC研发对靶点蛋白质量的核心要求

ADC分子的靶向作用首先依赖于抗体与细胞表面抗原的特异性结合，因此在早期筛选和分子表征阶段，需要使用具有正确表位和稳定结合活性的靶点蛋白进行评价。若重组蛋白存在明显聚集、降解或构象改变，可能造成SPR/BLI结合曲线异常或动力学参数偏差，影响候选抗体筛选以及ADC偶联前后结合能力比较。因此，具有良好均一性和功能活性的靶点蛋白是获得可靠分子互作数据的重要基础。

ADC靶点蛋白供应商评估的核心考察指标

在评估ADC靶点蛋白供应商时，建议重点关注以下核心指标：

表达系统：根据靶点蛋白的结构特征和研究目的选择合适的表达系统。HEK293等哺乳动物表达系统通常更有利于获得接近天然状态的蛋白折叠和翻译后修饰，从而保持抗体识别所需的构象表位，为ELISA、SPR/BLI等结合活性分析提供高质量的靶点蛋白

多维活性验证：关注验证方法是否与预期应用相匹配。例如：ELISA可用于评价抗体与靶点蛋白的结合活性，SPR/BLI可进一步获得结合动力学和亲和力参数。结合已知抗体或者抗体药开展验证，还可以确认靶点蛋白是否保留相应抗体识别的功能性表位。多种方法从不同维度提供结合活性证据，有助于提高蛋白功能评价的完整性。

纯度与均一性：SDS-PAGE可用于评价蛋白的电泳纯度和表观分子量，SEC-HPLC可进一步分析单体比例及聚集状态，SEC-MALS可用于确认分子量和聚合状态。多维理化分析能够更完整地反映蛋白的纯度和均一性。

批间一致性：关注供应商是否建立稳定的生产工艺和质量控制体系，供应商提供多批次的质量数据，可用于评估产品的批次稳定性，有利于长期项目和跨批次实验结果的准确性。

构建设计：ADC靶点蛋白的构建序列、标签设计和种属选择需要与具体研究目的相匹配。蛋白应覆盖候选抗体识别的关键胞外结构域，并提供明确的氨基酸范围及标签信息。His, Fc,AVItag及生物素化等不同形式可适配不同的ELISA，SPR/BLI，抗体筛选等实验体系。Human, Mouse,Cynomolgus等多种属蛋白则支持抗体种属交叉反应评价及临床前研究。

为什么选择具有SPR实测数据的ADC靶点蛋白？

SPR（表面等离子共振）技术能够实时检测抗体与靶点蛋白之间的结合和解离过程，并获得相关动力学参数，可从分子互作层面验证ADC靶点蛋白是否具有良好的抗体结合活性，进而为重组蛋白的功能性结合表现提供更直接的数据支持。同时，SPR数据也可为ADC靶点蛋白应用于后续候选抗体筛选、亲和力测定以及ADC偶联前后结合能力比较提供实验材料基础。因此，在比较不同ADC靶点蛋白供应商时，是否提供明确的SPR实测曲线和亲和力数据，是评价产品功能活性数据完整度的重要维度。

SPR之外， ADC靶点蛋白还需要哪些活性验证？

SPR可提供ADC靶点蛋白与抗体之间的动力学和亲和力信息。在此基础上，结合ELISA，BLI等不同防范，可从结合活性和动力学特征等多个维度评价蛋白功能，形成更加完整的活性验证数据。

ELISA：可用于评价ADC靶点蛋白与抗体的浓度依赖性结合，并获得EC50等表观活性指标。其操作成熟、通量较高，适用于蛋白结合活性验证及不同批次之间的活性比较。

BLI：与SPR类似，可实时检测抗体与靶点蛋白的结合和解离过程，并获的动力学及亲和力参数。BLI具有较好的多通道并行检测能力，可用于靶点蛋白结合活性验证、候选抗体筛选以及多样本或多批次比较。

抗体结合活性：使用具有明确靶点结合特性的抗体或已上市抗体药对重组靶点蛋白进行结合验证，可帮助确认蛋白是否保留预期的抗体识别特性。

义翘神州ADC靶点蛋白的质量特性与验证数据

义翘神州ADC靶点蛋白覆盖140多个热门ADC靶点蛋白（如HER2、TROP2、EGFR等）及新兴靶点（如EphA3、GFRA1、CLEC7A、c-MET等）。产品主要采用HEK293等哺乳动物细胞表达，纯度经SDS-PAGE/SEC-HPLC验证通常在95%以上。在功能活性方面，不同产品通过ELISA、SPR、BLI等多平台及抗体药验证。例如，以Human EG1.07FR蛋白（Cat#: 10001-H08H）为例，SPR实测显示其与Cetuximab具有良好的结合活性，测得KD为1.07nM，直观展示了该蛋白用于抗体结合及亲和力分析的功能表现。此外，义翘神州ADC靶点蛋白覆盖不同Human, Mouse, Cynomolgus等不同种属，并提供His,Fc, AVItag以及定点生物素化等多种形式，可用于需要定向固定或捕获的分子互作实验，多种属交叉验证和药代动力学研究。

结论

在ADC药物研发全流程中，靶点蛋白的质量是确保结合活性、亲和力及分子互作数据准确性的基础。通过综合考量表达系统、多维活性验证、纯度及批间一致性，研发人员可以更科学地进行选型决策。义翘神州ADC靶点蛋白提供覆盖140多个热门及新兴ADC靶点的重组蛋白，并通过多种理化及功能方法进行质量与活性验证，为ADC候选分子的筛选与评价提供了可靠的靶点蛋白支持。

常见问题解答

Q1：SPR数据不好是蛋白问题还是抗体问题？

A1：两者皆有可能。靶点蛋白的失活、聚集、固定方式或结合位点可及性异常，以及抗体变性、浓度标定或实验条件不合适，都可能影响SPR信号和动力学参数。选择具有良好纯度、均一性和明确SPR活性数据的靶点蛋白，有助于提高实验稳定性，并减少蛋白试剂质量带来的实验变异。

Q2：如何判断ADC靶点蛋白的活性验证数据？

A2：可重点关注活性检测方法、结合对象及关键结果。ELISA可通过浓度依赖性结合和EC50等指标反映蛋白的结合活性；SPR和BLI则可提供KD以及结合、解离等动力学信息结合多种方法的实测数据，可以更全面的了解靶点蛋白的功能性结合表现。

Q3：多种属蛋白的作用是什么？

A3：多种属蛋白（如人、鼠、猴）可用于种属交叉验证，比较候选抗体对不同物种靶点的结合差异，可为临床前研究及后续实验设计提供参考。

Q4：Avi-tag定点生物素化蛋白适合哪些检测？

A4：Avi-tag定点生物素化蛋白可通过生物素-链霉亲和素体系实现较为可控的蛋白捕获和固定，适用于SPR、BLI等分子互作分析。与随机偶联相比，定向固定有助于提高结合位点的可及性，并可减少固定方式差异对实验结果的影响。

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